鄰苯二甲醛是 國(guó)內(nèi)外新研發(fā)的化學(xué)消毒劑 ，近 年來(lái)在消毒領(lǐng)域頗受關(guān)注 ，一些文獻(xiàn)報(bào)道其消毒性 能優(yōu) 良¨ J。本研究鄰苯二 甲醛消毒劑 (武漢某企 業(yè)提供)是以鄰苯二 甲醛為主要有效成分 ，輔助成 分有非離子表面活性劑和堿性調(diào)節(jié)劑的復(fù)方制劑 ， 其原 液 的鄰 苯 二 甲醛 含 量 為 5．7g／L，pH 值 為 8．88。為觀察該復(fù)方消毒劑消毒相關(guān)性能 ，我們?cè)?實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)其殺菌效果 、理化性能和動(dòng)物毒性進(jìn) 行了試驗(yàn)觀察。現(xiàn)將觀察結(jié)果報(bào)告如下。

1 方法 1．1 理化 性能 測(cè)定

1．1．1 含量測(cè)定 鄰苯二 甲醛含量測(cè)定方法是按 該產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)提供 的方法，取鄰苯二 甲醛消毒劑 原液適量 ，用 0．25mol／L硫 酸標(biāo)準(zhǔn)液調(diào)節(jié) pH值至 7．0作為供試品。精密量取鄰苯二 甲醛消毒劑 中性 供試液 10．0ml，精密加鹽酸羥胺 中性溶液 25ml，搖 勻靜置 1h；精密加 6．5％三乙醇胺溶液 20ml，振搖 后用 0．25mol／L硫 酸標(biāo)準(zhǔn)液滴定 ?？?白對(duì) 照試劑 為 pH值 6．0～7．0的蒸餾水。重復(fù)3次取其平均值 計(jì)算鄰苯二甲醛含量。 1．1．2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 用加速試驗(yàn)法 ，將該鄰苯二甲 醛消毒劑原液密封包裝 ，一式 3份 ，置于 540(：溫箱 存放 14d。于儲(chǔ)存前后取樣按上述方法測(cè)定鄰苯二 甲醛含量，計(jì)算其下降率。 1．1．3 金 屬腐蝕性試驗(yàn) 選 擇直徑 24．0mm，厚 1．0ram(中心有 2mm直徑 的孔)4種金屬圓片(碳鋼、不銹鋼 、銅 和鋁 )，每個(gè)金 屬片表面積總值約 為 9．80cm ，購(gòu) 自中國(guó)疾病預(yù)防控制 中心環(huán)境所 消毒 檢測(cè)中心。金屬片均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格脫脂 、洗凈 ，干燥至恒 重 ，每片精確稱(chēng)重。將該鄰苯二甲醛消毒劑原液置 于帶蓋的玻璃缸 內(nèi)，消毒劑量按 200ml／片進(jìn)行浸泡 試驗(yàn)。浸泡至 72h后除去金屬樣片上腐蝕產(chǎn)物，徹 底清洗干凈 ，干燥至恒重 ，精確稱(chēng)重，記錄每片重量。 根據(jù)試驗(yàn)前后金屬片重量差 ，得到每種金屬片平均 損失重量，計(jì)算腐蝕率。試驗(yàn) 同時(shí)設(shè)蒸餾水浸泡不 銹鋼片對(duì)照。 1．2 殺 菌試驗(yàn) 1．2．1 菌懸液和菌片制備 試驗(yàn)指標(biāo)菌為枯草桿 菌黑色變種(ATCC9372)芽孢和大腸桿菌(8099)， 均由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院消毒檢測(cè)中心提供 ?？莶輻U菌 黑色變種經(jīng)分離培養(yǎng) ，取典型菌落接種 營(yíng)養(yǎng) 肉湯作 增菌培養(yǎng)，然后用營(yíng)養(yǎng)肉湯接種羅氏瓶 ，培養(yǎng)成芽孢 后，經(jīng)收取 、斷鏈 、滅活繁殖體、離心清洗 、芽孢計(jì)數(shù) ， 配制成芽孢懸液。(TSB)稀釋至所需濃度 ，用芽孢 懸液 0．02ml滴染于直徑 12mm，厚 0．5mm滅菌不 銹鋼載體片上 ，干燥制備成染菌載體 ，使回收菌數(shù)達(dá) 5×10cfu／片 ～5×10。cfu／片，備用。大腸桿菌取經(jīng) 24h培養(yǎng)的新鮮斜 面培養(yǎng)物 ，先用含胰蛋 白胨生理 鹽水稀釋液 (TPS)洗下菌苔，稀釋配制成含菌量為 1 ×10cfu／ml一5×10cfu／ml菌懸液 ，供能量試驗(yàn)用。 1．2．2 中和劑選擇試驗(yàn) 用枯草桿菌黑色變種芽 胞和大腸桿菌為代表菌株 ，設(shè)計(jì) 6組，分別用載體定 量殺菌和懸液定量殺菌試驗(yàn)法進(jìn)行 中和劑鑒定試 驗(yàn)。結(jié)果判定 ，以第 1組有極少量菌生長(zhǎng)或無(wú)菌生 長(zhǎng)；第 2組有菌生長(zhǎng)且明顯少于第 3、4、5組 ，但多于 第 1組 ；第 3、4、5組菌數(shù)接近且符合 陽(yáng)性對(duì)照組菌 數(shù)要求 ，第 6組無(wú)菌生長(zhǎng)。符合上述條件 ，試驗(yàn)重復(fù) 3次結(jié)果一致 ，判定所選中和劑及其濃度適宜。 1．2．3 載體浸泡定量殺 菌試 驗(yàn) 試驗(yàn) 在 19℃ ～ 21℃水浴中進(jìn)行。先將鄰苯二甲醛消毒劑原液按每 片 5．0ml加人滅 菌平皿 內(nèi)(陽(yáng)性對(duì) 照組用 TPS)。 置水浴 中預(yù)溫 5min～10rain，加入染菌載體 ，作用 至預(yù)定時(shí)間后 ，將載體取出加人盛 5．0ml中和劑試 管中。中和作用 10min后，取樣液接種無(wú)菌平皿 ， 一 式 2份 ，傾注用胰蛋 白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，作活菌 計(jì)數(shù)培養(yǎng) 。試驗(yàn)重復(fù) 3次。 1．2．4 載體浸泡定性 殺菌試驗(yàn) 試 驗(yàn)在 l9℃ 一 21℃水浴中進(jìn)行。先將鄰苯二甲醛消毒劑原液按每 片 5．0ml加入滅 菌平皿 內(nèi)(陽(yáng)性 對(duì)照組用 TPS)。 置水浴中預(yù)溫 5min一10min，加入載體 ，作用至預(yù) 定時(shí)間后 ，將載體取 出加入盛 5．0ml中和劑 TSB試 管中。另取出 2片 ，移入一含 10．0ml中和劑中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。試驗(yàn)組和陽(yáng)性對(duì)照組均培養(yǎng)一周， 觀察結(jié)果 。試驗(yàn)重復(fù) 5次。 1．3 醫(yī)療器械的消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn) 1．3．1 模擬消毒現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn) 載體為截?cái)嗟尼t(yī)用止 血鉗軸 至齒端部位 ，用無(wú)菌移液器將 0．02ml枯草 桿菌黑色變種芽孢懸液滴染于朝上的齒部并用無(wú)菌 L形鉑金絲涂勻 ，置 37℃溫箱內(nèi)干燥后制成染菌載 體 。按每個(gè)載體 10ml用量將 30個(gè)染菌載體浸沒(méi) 于鄰苯二 甲醛消毒劑(陽(yáng)性對(duì)照為 3個(gè)染菌載體浸 沒(méi)于無(wú)菌蒸餾水 中)原液中進(jìn)行消毒處理。在 19~C ～ 21qC水浴條件下 ，作用至規(guī)定時(shí)間，分別將載體取 出移人含 10ml中和劑溶 液的塑料試管 內(nèi)振 蕩搖 勻，取洗脫液或其稀釋液作活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 1．3．2 模擬滅菌現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn) 取上述相同的 20個(gè)染 菌載體按每個(gè)載體 10ml用量浸沒(méi)于鄰苯二甲醛消 毒劑(陽(yáng)性 對(duì)照為 2個(gè) 染菌 載體浸沒(méi) 于標(biāo) 準(zhǔn)硬水 中)原液中，在 19~C～21℃水浴條件下 ，作用至規(guī)定 時(shí)間，分別將載體取 出移人含 10ml中和劑肉湯的 試管 內(nèi)(共 20支)進(jìn) 行定性培養(yǎng) 7d，觀察 最終結(jié) 果。試驗(yàn)重復(fù) 3次。 另取 3個(gè)染菌載體分別放入相同用量的標(biāo)準(zhǔn)硬 水中，作用后將每個(gè) 載體移人含 l0ml中和劑溶液 的試管內(nèi)振蕩搖勻 ，取洗脫液或其稀釋液作活菌培 養(yǎng)計(jì)數(shù)。 1．4 能量試驗(yàn) 吸取大腸桿菌新鮮菌懸液 6．0ml于無(wú) 菌試管 內(nèi)，加入 4．0ml酵母液(用標(biāo)準(zhǔn)硬水將酵母 粉配成 的 50％溶液 )混勻，使 回收菌數(shù)達(dá) 10cfu／ml～10 cfu／ml，制成實(shí)驗(yàn)用 菌懸液 。將 待測(cè)鄰苯二 甲醛消 毒劑用硬水稀 釋成含 鄰苯二 甲醛為 0．43％ (A)、 0．28％(B)、0．14％ (C)等 3個(gè)梯度濃度溶液 ，以每 管 3mL分別裝于無(wú)菌試管內(nèi)。按 2002年版《消毒 技術(shù)規(guī)范》能量試 驗(yàn)操作 時(shí)間表規(guī)定 的時(shí) 間和順 序，分 3次每次加入 1．0ml菌懸液 ，混勻作用 8或 10rain，取混合液移種于 5支盛有 5ml含中和劑的 營(yíng)養(yǎng)肉湯管中。每 131次 ，連續(xù) 3日重復(fù) 3次加菌 試驗(yàn)共 45支 試驗(yàn) 管 與 陽(yáng)性 、陰性 對(duì)照組 一 同置 37~C培養(yǎng) 箱 中培 養(yǎng) 48h，觀察 是否有菌 生長(zhǎng)。按 《消毒技術(shù)規(guī) 范》規(guī)定 的標(biāo)準(zhǔn) ，判定能量試驗(yàn)結(jié)果， 判定為最低合格濃度。 1．5 毒性試驗(yàn) 1．5．1 急性經(jīng) 口毒性試驗(yàn) 取體重 18．0g一22．0 g清潔級(jí)昆明種小鼠20只(河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 中心提 供 ，實(shí) 驗(yàn) 動(dòng) 物 生 產(chǎn) 許 可證 號(hào) SCXK(豫 )2005— 0001)，隨機(jī)分為 2組 ，每組 1O只，雌雄各半。設(shè)定 劑量組 ，采用霍恩氏法 ，一次經(jīng)口灌 胃給藥。給藥后連續(xù)觀察 14d，記錄小 鼠各種中毒表現(xiàn)及死亡情況， 計(jì)算 LD。值。 1．5．2 小 鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn) 取體重 25．0g一30．0g清潔級(jí)昆明種小鼠雌雄各 25只(動(dòng) 物來(lái)源和許 可證號(hào) 同上 )，隨機(jī)分為 5組 ，每組 10 只，雌雄各半。受試 物劑量分別 為 5000、2000、500 mg／kg體重 ，陽(yáng)性對(duì)照為 40mg／kg體重環(huán)磷酰胺 ， 蒸餾水為陰性對(duì)照。采用經(jīng) 口灌 胃30h染毒法 ，每 次灌胃量為 0．2ml／10g體重 ，間隔 24h灌 胃2次。 末次給樣品后 6h頸椎脫 臼處死動(dòng)物 ，取胸骨骨髓 用小牛血清稀釋 涂片，甲醇 固定 ，Giemsa染 色。在 光學(xué)顯微鏡下 ，每 只動(dòng)物計(jì)數(shù) 1000個(gè) 嗜多染紅細(xì) 胞 ，觀察含有微核 的嗜多染紅細(xì)胞數(shù) ，計(jì)算 微核率 (以千分率計(jì))；計(jì)數(shù) 200個(gè) 嗜多染紅 細(xì)胞 ，計(jì)算嗜 多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比例 (PCE／NCE)。2 結(jié)果 2．1 理 化性 能試驗(yàn) 結(jié)果 經(jīng)檢測(cè) ，該復(fù)方鄰 苯二 甲醛消毒劑原液的鄰苯 二 甲醛含量均值為 5．7g／L。該 產(chǎn)品密封包裝儲(chǔ)存 于54~C溫箱 14d，鄰苯二 甲醛含量均值為 5．2 L， 平均下降率為 8．72％(表 1)。

金屬腐蝕性試驗(yàn)結(jié)果表 明，用該復(fù)方鄰苯二甲 醛消毒劑原液浸泡不銹鋼、碳鋼、鋁 、銅片 72h后 ， 對(duì)不銹 鋼、碳 鋼 、鋁 、銅 的 腐 蝕 速 率 (R)依 次 為 0．0000、0．0414、0．0138、0．1079mm／a，依據(jù)腐蝕性 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判定 ：對(duì)不銹鋼基本無(wú)腐蝕 ，對(duì)鋁 、碳鋼有 輕度腐蝕 ，對(duì)銅有 中度腐蝕 。 2．2 中和劑選擇試驗(yàn)結(jié)果 用含 l0 L甘氨酸 、50g／L吐溫 80、3g／L卵磷 脂磷酸緩沖液組成 的中和劑，可有效 中和該復(fù)方鄰 苯二甲醛消毒劑原液對(duì)枯草桿菌黑色變種芽孢和大 腸桿菌的殘留作用 ，且 中和劑及 中和產(chǎn)物對(duì)受試菌 的生長(zhǎng)和培養(yǎng)基均無(wú)不良影響，表明以上中和劑符 合要求(表 2)。 2．3 殺菌試驗(yàn)結(jié)果 2．3．1 載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果 試驗(yàn)表明，含 5．7g／L鄰苯二甲醛 的該消毒劑原液對(duì)載體上枯草 桿菌黑色變種芽孢作用 60min，平均殺滅對(duì)數(shù)值各次均大于 5．00(表 3)。 2．3．2 載體浸泡定性滅菌試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表 明，用 該鄰苯二甲醛的該消毒劑原液浸泡作用 120min，所 有投入試驗(yàn)樣片的含中和劑 的肉湯管培養(yǎng) 7d均無(wú) 菌生長(zhǎng)，陽(yáng)性對(duì)照組均有菌生長(zhǎng) ，陽(yáng)性對(duì)照回收菌數(shù) 對(duì)數(shù)值為 5．89～5．99，對(duì)細(xì)菌芽 孢達(dá) 到完全殺滅 (表 3)。

2．4 模 擬現(xiàn) 場(chǎng) 試驗(yàn)結(jié) 果 2．4．1 模擬消毒現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果 醫(yī)療 器械的消毒 模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果表 明，用該復(fù)方鄰苯二 甲醛的該 消毒劑原液對(duì) 30個(gè)染有枯草桿菌黑色變種芽孢 的 止血鉗作用 60min，殺滅對(duì)數(shù)值各次均大于 3．0O。 2．4．2 模擬滅菌現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明，用該鄰 苯二 甲醛的該消毒劑原液對(duì) 60個(gè)染有枯草桿菌黑 色變種芽孢的止血鉗作用 120min，定性培養(yǎng) 7d，60 支含 中和劑的肉湯管均無(wú)菌生長(zhǎng) ，陽(yáng)性對(duì)照管均有 菌生長(zhǎng) ，陽(yáng)性對(duì)照回收菌數(shù)值為 1．80×10。cfu／樣本 ～ 2．15×10cfu／樣本 。 2．5 能量試 驗(yàn) 結(jié)果 連續(xù) 3次能量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表 明，該消毒劑對(duì)大腸 桿菌的最低合格濃度為 2800mg／L鄰苯二甲醛。 2．6 毒性試驗(yàn)結(jié)果 急性經(jīng) 口毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，該 復(fù)方鄰苯二 甲 醛的該消毒劑對(duì)昆明種雌、雄性小 鼠 LD卯均大于 5000mg／kg體重 ，屬實(shí)際無(wú)毒級(jí)物質(zhì)。變種芽孢 的平 均殺 滅率為 96．03％ ；含 5000mg／L 鄰苯二甲醛單組分 ，對(duì)枯草桿菌黑色變種芽孢作用 5min，平均殺滅率僅 87．37％。

3 討 論 鄰苯二 甲醛 (ortho—phthalaldehyde，OPA)分子 式為 CH 0 ，分子量為 134．13，成品為淡黃色針狀 晶體，溶于水 、醇、醚等有機(jī)溶 劑。研究表 明，OPA 對(duì)細(xì)菌繁殖體、真菌 、分枝桿菌、病毒 、細(xì)菌芽孢都有 很強(qiáng) 的殺滅 作用 。OPA 作為 一種 高 效 消毒 劑在 1999年通過(guò)了美 國(guó) FDA注冊(cè)認(rèn)證 j，該消毒劑 以 復(fù)方液體制劑在 國(guó)內(nèi)也得到 國(guó)家衛(wèi)生部注冊(cè)。 關(guān)于鄰苯二 甲醛類(lèi)消毒劑殺菌試驗(yàn)等消毒相關(guān) 性能研究已有不少文獻(xiàn)報(bào)道 J，都證明其是一種 廣譜 、高效 、低腐蝕性 、低刺激性、使用濃度低的新型 消毒劑 。單組分 OPA對(duì)細(xì)菌芽孢的殺滅作用 比較 慢 ，需要經(jīng)過(guò)復(fù)配以及調(diào)整其溶液的酸堿度 ，以提高其殺菌效率 。本研究通過(guò)將 OPA和癸 甲溴銨進(jìn)行 復(fù)配發(fā)現(xiàn) ，僅需加人少量 的雙鏈季銨鹽類(lèi) 消毒劑 即 可明顯提高其消毒效果 ，可以滿(mǎn)足獸醫(yī)臨床上對(duì)細(xì) 菌芽孢的消毒要求。試驗(yàn)證 明，將本研究復(fù)方鄰苯 二甲醛消毒劑原液稀釋 8倍 ，對(duì)幾種豬 源致病菌平 均殺滅率達(dá)到 99％左右 ，只需要稍微提高濃度或延 長(zhǎng)作用時(shí)間，即可達(dá)到規(guī)定的消毒指標(biāo)要求。本研 究結(jié)果 ，為 OPA用 于養(yǎng)殖領(lǐng)域消毒提供 了科學(xué) 依 據(jù)。 當(dāng)前 ，國(guó)內(nèi)外人畜共患病特別是人畜共患傳染 病形勢(shì)嚴(yán)峻，很多動(dòng)物傳染病都可能成為人傳染病 發(fā)展源頭 ，沒(méi)有動(dòng)物病原的有效控制和凈化，人類(lèi)就 很難控制和凈化 自身。當(dāng)前豬流感 、禽流感 、豬鏈球 菌等人畜共患病既對(duì)動(dòng)物養(yǎng)殖造成了嚴(yán)重危害，也 嚴(yán)重威脅了人類(lèi)的健康 ，因此研究復(fù)方 OPA消毒劑 控制動(dòng)物源性疾病能提高動(dòng)物養(yǎng)殖效益 ，同時(shí)對(duì)人 類(lèi) 自身生存環(huán)境的凈化具有重要 的現(xiàn)實(shí)意義。

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